ELISA Test

Die ELISA Test technologie wird häufig in biomedizinischen Studien eingesetzt. Es hilft bei diagnostischen Fällen und wissenschaftlichen Ursachen, wo es immer noch eine sehr beliebte analytische Technologie ist. Es ist schnell, präzise und einfach zu bedienen. Es kann automatisiert werden. Es ist auch sicher und ziemlich billig.

Wozu dient der ELISA Test?

Der ELISA-Test (enzym-linked immunosorbent assay) ist ein immunoenzymatischer Test für die Festphase. Seine Rolle ist für den Nachweis und die Quantifizierung von Proteinen, die in der Testprobe enthalten sind, wie Antikörper oder Antigene einer Proteinnatur. Die Methode basiert auf der Bildung von Bindungen zwischen dem Antigen und dem Antikörper, wodurch eine Farbreaktion sichtbar wird, die dank konjugierter mit Immunglobulinenzymen auftritt und für diese Substrate geeignet ist.

Verfahren:

Die Fliese ist mit einer Schicht Antigen bedeckt. Später werden einige Antikörper, die spezifisch für das Antigen sind und mit einem korrekten Enzym markiert sind, hinzugefügt und wir setzen mit einer Inkubation fort. Während dieser Zeit verbinden sich die spezifischen Antikörper mit einem Antigen, und diejenigen, die nicht verbunden sind, werden ausgewaschen.
Das Lösungssubstrat/Chromophor wird einer Fliese zugesetzt und das Enzym katalysiert die Reaktion. In der Wirkung können wir das farbige Produkt erkennen . Am Ende führen wir eine spektrophotometrische Messung durch

Welche Arten von ELISA Test gibt es? Was ist ein direkter ELISA?

Es gibt vier Arten oder Kategorien von ELISA Test:

Direkter ELISA: Bindung eines Antigens an eine Polystyrolplatte, gefolgt von einem Antikörper, der mit einem Enzym markiert ist, das mit dem Antigen und einem messbaren Substrat reagieren kann.
Indirekter ELISA: Anheftung eines Antigens an eine Polystyrolplatte, gefolgt von einem primären oder nicht markierten Antikörper und dann einem Antikörper, der mit einem Enzym markiert ist, das sowohl mit dem Primärantikörper als auch mit dem Substrat reagieren kann.
Sandwich ELISA: Ein Capture-Antikörper wird auf der Polystyrolplatte fixiert, dann wird ein Antigen hinzugefügt, das das Antigen spezifisch bindet oder einfängt. Ein zweiter Antikörper, ebenfalls spezifisch für das Antigen, aber anders als der Capture-Antikörper, wird hinzugefügt und das Antigen ’snares‘. Diesem zweiten Antikörper folgt dann ein Antikörper, der mit einem für den zweiten Antikörper spezifischen Enzym markiert ist, das mit einem messbaren Substrat reagieren kann.
Kompetitiver ELISA: Dieser Test ähnelt dem Sandwich-ELISA, beinhaltet jedoch die Zugabe konkurrierender Antikörper oder Proteine, wenn der zweite Antikörper hinzugefügt wird. Dies führt zu einer Abnahme des vom Substrat erzeugten Signals. Dieser Test liefert gute und sehr spezifische Ergebnisse.

Vor- und Nachteile

Vorteile

• Hohe Sensitivität und Spezifität: ELISAs detektieren üblicherweise Antigene auf Pikogramm-Ebene mit hoher Spezifität unter Verwendung von Antikörpern.
• Hoher Durchsatz: Kommerzielle ELISA-Tests sind normalerweise im 96-Well-Plattenformat verfügbar. Der Test kann jedoch problemlos auf 384-Well-Platten angepasst werden.
  Einfache Ausführung: Protokolle sind einfach zu befolgen und erfordern wenig Bearbeitungszeit.
• Quantitativ: es kann die Konzentration des Antigens in einer Probe bestimmen.
  Es kann verschiedene Arten von Proben analysieren: Serum, Plasma, Zell- und Gewebeextrakte, Urin und Speichel, unter anderem.

Nachteile

• Temporäre Messungen: Der Nachweis basiert auf Enzym/Substrat-Reaktionen und daher muss der Messwert in kurzer Zeit erhalten werden.
• Begrenzte Antigeninformationen: Informationen, die auf die Menge oder das Vorhandensein des Antigens in der Probe beschränkt sind.

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Referenzen

1. Research Gate
2. Biosense