Feed me : Stammzellkultur
„Stammzellkultur ist eine Kunst, und wir stecken noch in den Kinderschuhen“, sagt Lindy O’Clair, BioAnalytics Reagents and Consumables Manager, Product Management BioAnalytics Workflows, Sartorius. „Es ist wichtig, die Qualität des Ausgangsmaterials zu berücksichtigen. Das Verständnis der Reagenzien und ihrer Auswirkungen auf die Lebensfähigkeit und Reproduzierbarkeit von Zellkulturen sowie die Kultivierung in zuverlässigen Geräten ermöglicht es, zuverlässige und reproduzierbare Daten zu erhalten.“
Historisch wurden PSCs auf einer Schicht von Feederzellen gezüchtet, normalerweise mitotisch inaktivierte Fibroblasten, eine Technik, die heute noch verwendet wird. Diese Feederzellen lieferten nicht nur eine physikalische Stützmatrix, sondern konditionierten das Kulturmedium auch mit (manchmal nicht identifizierten) Wachstumsfaktoren, die für die Entwicklung der Stammzellen und ihre Aufrechterhaltung in einem undifferenzierten Zustand notwendig sind. Neben Reproduzierbarkeitsproblemen hat das Feederzellensystem einige Nachteile, darunter die Tatsache, dass es arbeitsintensiv ist und die Fütterungsoberfläche im Voraus vorbereitet werden muss. Es kann zu gemischten Kulturen führen, die schwer zu trennen sind. Darüber hinaus besteht bei Interspezies-Fütterung (Mausfibroblasten zum Beispiel mit humanen PSCs) die Gefahr einer Pathogenübertragung.
Nicht-Saatkulturen sind einfacher und weniger zeitaufwendig einzurichten und zu warten, reproduzierbarer, leichter skalierbar und leiden nicht unter den möglichen Fallstricken von Co-Kulturen.
In Abwesenheit einer Feederzellschicht haften PSCs jedoch nicht an üblichen Gewebekulturoberflächen. Eine breite Palette von Matrizen, die normalerweise von extrazellulären Matrixproteinen (ECM) abgeleitet oder nachgeahmt werden, allein oder in Kombination, werden als physikalische Stützen sowohl für (relativ) flache als auch für dreidimensionalere Kulturen verwendet. Forscher können die Kulturplatten entweder selbst mit der Matrix ihrer Wahl bei der gewünschten Verdünnung beschichten, je nachdem, welchem Protokoll sie folgen, oder vorbeschichtete Kulturplatten kaufen.